Рибонуклеаза H (РНКаза H) представляет собой эндорибонуклеазу, которая специфически разлагает цепь РНК гибрида РНК-ДНК с образованием 5'-концевых фосфатных олигорибонуклеотидов и одноцепочечной ДНК._x000D_ _x000D_ Применение_x000D_ Удаление мРНК во время синтеза кДНК второй цепи. Удаление поли (А) последовательностей из мРНК в присутствии олиго (дТ). Олигодезоксирибонуклеотид-направленное расщепление РНК._x000D_ _x000D_ Источник_x000D_ очищен от E.coli, экспрессирующей ген РНКазы H E.coli на плазмиде._x000D_ _x000D_ Тестирование производительности и качества_x000D_ Рибонуклеаза, неспецифическая эндодезоксирибонуклеаза, 3´ и 5´ экзодезоксирибонуклеаза._x000D_ _x000D_ Определение единицы _x000D_ Одна единица гидролизует 1 нмоль РНК в 3H-меченный поли (А) поли (dT) превращается в растворимый в кислоте материал через 20 мин при 37 ° С._x000D_ _x000D_ Условия реакции:_x000D_ 20 мМ Трис-HCl (pH 7,5), 0,1 М KCl, 10 мМ MgCl 2 , 0,1 мМ DTT, 5% (вес / объем) сахарозы, 0,5 нмоль 3 H-меченого поли (А) поли (dT), и фермент в 50 мкл в течение 20 мин при 37 ° С.

Щелочная фосфатаза термочувствительная, FastAP™ катализирует выделение 5'- и 3'-фосфатных групп из ДНК, РНК и нуклеотидов. Этот фермент также удаляет фосфатные группы из белков. _x000D_ _x000D_ FastAP представляет собой новую щелочную фосфатазу, которая активна во всех буферах рестрикционных ферментов Thermo Scientific, а также в буферах ПЦР. Он дефосфорилирует все типы концов ДНК (тупые, 5'- и 3'-выступы) за 10 минут при 37 ° C. Фермент инактивируется через 5 минут при 75 ° C ( см. Рисунок 1 в вспомогательных данных). Поэтому удаление лигатуры щелочной фосфатазы не требуется. _x000D_ _x000D_ Основные моменты_x000D_ _x000D_ • Рекомбинантный фермент_x000D_ • Быстрое дефосфорилирование -10 минут при 37 ° C _x000D_ •Быстрая и полная инактивация - 5 минут при 75 ° C _x000D_ • Одновременное переваривание и дефосфорилирование векторной ДНК_x000D_ • 100% активность в рестрикционном ферменте и ПЦР-буферах _x000D_ • Очистка ПЦР в сочетании с Exo I_x000D_ • Дефосфорилирование белка _x000D_ _x000D_ Один протокол для всех типов концов ДНК :_x000D_ • 5'-выступы _x000D_ • 3'-выступы _x000D_ • тупые концы _x000D_ • одиночные нуклеотиды _x000D_ _x000D_ Применение_x000D_ _x000D_ • Дефосфорилирование клонирующей векторной ДНК для предотвращения рециркуляции во время лигирования _x000D_ • Одновременное переваривание и дефосфорилирование векторной ДНК _x000D_ • Очистка продукта ПЦР: деградация нуклеотидов до секвенирования продукта ПЦР_x000D_ • Дефосфорилирование нуклеиновой кислоты , 5'-концов до маркировки с Т4 полинуклеотидкиназы_x000D_ • Другие применения , где дефосфорилирование ДНК и РНК субстратов необходимо _x000D_ • Белок дефосфорилировани