Рибонуклеаза H (РНКаза H) представляет собой эндорибонуклеазу, которая специфически разлагает цепь РНК гибрида РНК-ДНК с образованием 5'-концевых фосфатных олигорибонуклеотидов и одноцепочечной ДНК._x000D_ _x000D_ Применение_x000D_ Удаление мРНК во время синтеза кДНК второй цепи. Удаление поли (А) последовательностей из мРНК в присутствии олиго (дТ). Олигодезоксирибонуклеотид-направленное расщепление РНК._x000D_ _x000D_ Источник_x000D_ очищен от E.coli, экспрессирующей ген РНКазы H E.coli на плазмиде._x000D_ _x000D_ Тестирование производительности и качества_x000D_ Рибонуклеаза, неспецифическая эндодезоксирибонуклеаза, 3´ и 5´ экзодезоксирибонуклеаза._x000D_ _x000D_ Определение единицы _x000D_ Одна единица гидролизует 1 нмоль РНК в 3H-меченный поли (А) поли (dT) превращается в растворимый в кислоте материал через 20 мин при 37 ° С._x000D_ _x000D_ Условия реакции:_x000D_ 20 мМ Трис-HCl (pH 7,5), 0,1 М KCl, 10 мМ MgCl 2 , 0,1 мМ DTT, 5% (вес / объем) сахарозы, 0,5 нмоль 3 H-меченого поли (А) поли (dT), и фермент в 50 мкл в течение 20 мин при 37 ° С.

Набор для клонирования pCR ™ 8 / GW / TOPO® TA обеспечивает простое 5-минутное клонирование и доступ к векторной платформе клонирования Gateway®. Вектор pCR ™ 8 TOPO® TA содержит минимальную MCS, поэтому вы добавляете больше своей вставки и меньше вектора.

С запатентованными att, вектор pCR ™ 8 - это самый простой способ создания Entry Clone, который облегчает доступ через клонирование рекомбинации Gateway® к множеству векторов экспрессии без утомительного суб-клонирования, что экономит ваше драгоценное время исследований.ППР ™ 8 / GW / TOPO® ТА Cloning Kit предлагает: • ATT сайты для быстрой рекомбинации в различные векторы назначения Gateway®

• 3'-T свесами для прямого лигирования Taq-амплифицированных продуктов ПЦР

• Секвенирующие грунтовочные сайты в пределах 55 п.о. места вставки обеспечивают вам последовательность больше вставки, меньше вектора.

• Ген устойчивости к спектиномицину для надежного отбора в E. coli.

• EcoRI-сайты, фланкирующие сайт для вставки продукта PCR для легкого удаления вставок.

Этот комплект включает One Shot® TOP10 Химически компетентная E. coli .

Тип вектора: пПР

Метод клонирования: TOPO® с Gateway®

Линия продуктов: Gateway®, One Shot®, TA Cloning®, TOPO®

Размер товара: 20 реакций

Набор для клонирования pCR ™ 8 / GW / TOPO® TA содержит адаптированные к TOPO® готовые к использованию pCR ™ 8 / GW / TOPO® Vector, dNTP, солевые растворы, стерильные воды, направляющие и обратные последовательности для праймеров, контроль Шаблоны и ПЦР-праймеры, One Shot® TOP10 Химически компетентные E. coli Химически компетентные E. coli, SOC Medium и контрольная плазмида pUC19. Храните One Shot® E. coli при температуре -80 ° C. Храните все остальные компоненты при -20 ° C. Все реагенты гарантируют стабильность в течение 6 месяцев при правильном хранении.

ДНК бактериофага лямбда (da– dc– - это умеренный бактериофаг Escherichia coli. Вирионная ДНК является линейной и двухцепочечной (48502 п.о.) с одноцепочечными дополнительными 5'-концами длиной 12 п.о. После того как фаговая частица вводит свою хромосому в клетку, хромосома циркулирует по концевому соединению. В литическом пути экспрессируются гены фага, кодирующие репликацию, лизис и белки вирионов. Хромосома реплицируется, и реплики расщепляются и упаковываются в частицы фага потомства. В лизогенном пути экспрессия гена фага подавляется, и круговая хромосома встраивается в бактериальную хромосому путем рекомбинации.

Щелочная фосфатаза термочувствительная, FastAP™ катализирует выделение 5'- и 3'-фосфатных групп из ДНК, РНК и нуклеотидов. Этот фермент также удаляет фосфатные группы из белков. _x000D_ _x000D_ FastAP представляет собой новую щелочную фосфатазу, которая активна во всех буферах рестрикционных ферментов Thermo Scientific, а также в буферах ПЦР. Он дефосфорилирует все типы концов ДНК (тупые, 5'- и 3'-выступы) за 10 минут при 37 ° C. Фермент инактивируется через 5 минут при 75 ° C ( см. Рисунок 1 в вспомогательных данных). Поэтому удаление лигатуры щелочной фосфатазы не требуется. _x000D_ _x000D_ Основные моменты_x000D_ _x000D_ • Рекомбинантный фермент_x000D_ • Быстрое дефосфорилирование -10 минут при 37 ° C _x000D_ •Быстрая и полная инактивация - 5 минут при 75 ° C _x000D_ • Одновременное переваривание и дефосфорилирование векторной ДНК_x000D_ • 100% активность в рестрикционном ферменте и ПЦР-буферах _x000D_ • Очистка ПЦР в сочетании с Exo I_x000D_ • Дефосфорилирование белка _x000D_ _x000D_ Один протокол для всех типов концов ДНК :_x000D_ • 5'-выступы _x000D_ • 3'-выступы _x000D_ • тупые концы _x000D_ • одиночные нуклеотиды _x000D_ _x000D_ Применение_x000D_ _x000D_ • Дефосфорилирование клонирующей векторной ДНК для предотвращения рециркуляции во время лигирования _x000D_ • Одновременное переваривание и дефосфорилирование векторной ДНК _x000D_ • Очистка продукта ПЦР: деградация нуклеотидов до секвенирования продукта ПЦР_x000D_ • Дефосфорилирование нуклеиновой кислоты , 5'-концов до маркировки с Т4 полинуклеотидкиназы_x000D_ • Другие применения , где дефосфорилирование ДНК и РНК субстратов необходимо _x000D_ • Белок дефосфорилировани