Набор для клонирования Zero Blunt® TOPO® PCR обеспечивает высокоэффективную 5-минутную стратегию клонирования с одним шагом («клонирование TOPO®») для прямой вставки продуктов ПЦР с тупым концом, амплифицированных с коррекцией термостабильных полимераз в вектор плазмиды. Каждый набор имеет вектор Zero Blunt® TOPO® (см. Рисунок), содержащий ген ccd B для положительного отбора, только разрешая рост плазмидных векторов с рекомбинантами. Комплекты Zero® Blunt® TOPO® доступны с различными компетентными ячейками или без компетентных ячеек в зависимости от ваших потребностей и бюджета. Особенности комплектов клонирования Zero® Blunt® TOPO® для ПКП: _x000D_ _x000D_ быстрый и простой переход от ПЦР к клонам всего за 3 шага и всего за 5 минут практического _x000D_ использования.получить до 95% клонов с правильной вставкой. _x000D_ Доказанная надежность в течение более десяти лет с более чем 4000 цитатами. _x000D_ Простой - не требуется лигаза, процедуры после ПЦР или праймеры ПЦР, содержащие конкретные последовательности.

Данный мастер-микс облегчает объединение примыкающих 5'-фосфатных и 3'-гидроксильных концов в дуплексной ДНК посредством образования фосфодиэфирной связи. Его можно использовать для соединения фрагментов ДНК как с липкими концами, так и с тупыми концами, а также для восстановления повреждений в двухцепочечной ДНК с 3'-гидроксильным и 5'-фосфатным концами. Лигирование может быть выполнено с ДНК в воде, TE, элюирующем буфере или буферах 1X Anza._x000D_ _x000D_ Преимущества:_x000D_ • Лигирование завершается через 15 минут при комнатной температуре_x000D_ • Один мастер-микс для реакций лигирования с липким концом и тупым концом_x000D_ • Готовый формат сокращает количество этапов пипетирования._x000D_ • 4X концентрация позволяет использовать более разбавленную ДНК в реакции лигирования без концентрации

Набор реагентов для клонирования продуктов ПЦР CloneJET™ представляет собой усовершенствованную систему положительной селекции чужеродных ДНК в ходе их высокоэффективного клонирования. Набор предназначен для клонирования ДНК-фрагментов, полученных в полимеразной цепной реакции (ПЦР) с участием Pfu ДНК-полимеразы, Taq ДНК-полимеры, Taq ДНК-полимеразы Dream™ (ЕР0701) или других термостабильных ДНК-полимераз. С помощью этого набора можно также успешно клонировать и другие фрагменты ДНК, как с «тупыми», так и с «липкими» концами._x000D_ _x000D_ _x000D_ В состав набора входит специальный линейный вектор для клонирования pJET1.2/blunt, обеспечивающий положительную селекцию клонов. Он содержит область множественного клонирования, промотор T7 ДНК-полимеразы для транскрипции in vitro, а также «летальный» ген, структура которого нарушается при лигировании в вектор клонируемого фрагмента ДНК. Размер встраиваемой ДНК может составлять от 6 до 10000 пар нуклеотидов. Фосфорилирование фрагментов ПЦР не требуется. Лигирование в вектор pJET1.2/blunt фрагментов ДНК с «тупыми» концами, генерируемыми ДНК-полимеразами с корректирующей активностью, в вектор pJET1.2/blunt занимает 5 мин. _x000D_ _x000D_ Выступающие остатоки dA, образующиеся на 3ꞌ-концах продукта ПЦР при использовании Taq ДНК-полимеразы или других термостабильных ДНК-полимераз, лишенных корректирующей активности, перед лигированием в вектор удаляются специальным термостабильным ферментом, входящим в состав набора. Время этой реакции составляет 5 мин. Все распространенные лабораторные штаммы E. coli пригодны для трансформации рекомбинантной ДНК. _x000D_ Исходный циклизованный вектор pJET1.2/blunt после трансформации экспрессирует эндонуклеазу рестрикции, которая подвергает его гидролизу. Клетки E. coli, не содержащие рекомбинантный вектор, погибают при посеве. Вставка ПЦР продукта инактивирует «летальный» ген, что приводит к ингибированию синтеза эндонуклеазы рестрикции. В результате на культуральном планшете появляются только рекомбинантные клоны, содержащие вставку целевой ДНК. Таким образом, процедура клонирования существенно ускоряется из-за отсутствия необходимости проведения «сине-белого» теста. _x000D_ Праймеры, входящие в состав набора, позволяют провести секвенирование и подтвердить нуклеотидную последовательность клонированного фрагмента ДНК._x000D_ _x000D_ _x000D_ Состав набора._x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Компонент_x000D_ _x000D_ _x000D_ K1231 _x000D_ 20 экспериментов_x000D_ _x000D_ _x000D_ K1232 _x000D_ 40 экспериментов_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Вектор для клонирования pJET1.2/blunt (50 нг/мкл)_x000D_ _x000D_ _x000D_ 24 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ 46 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Двукратный буфер для реакции_x000D_ _x000D_ _x000D_ 300 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ 600 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Т4 ДНК-лигаза (5 ед.акт./мкл)_x000D_ _x000D_ _x000D_ 24 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ 46 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Фермент для удаления «липких» концов ДНК_x000D_ _x000D_ _x000D_ 24 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ 46 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Прямой праймер pJET1.2 для секвенирования (10 мкМ водный раствор)_x000D_ _x000D_ _x000D_ 50 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ 100 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Обратный праймер pJET1.2 для секвенирования (10 мкМ водный раствор)_x000D_ _x000D_ _x000D_ 50 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ 100 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Контрольный ПЦР-фрагмент длиной 976 пар нуклеотидов с дополнительными остатками dA на 3'-концах (24 нг/мкл)_x000D_ _x000D_ _x000D_ 8 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ 12 мкл_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Вода без примеси нуклеаз_x000D_ _x000D_ _x000D_ 1,25 мл_x000D_ _x000D_ _x000D_ 1,25 мл_x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ _x000D_ Все компоненты набора протестированы в экспериментах по трансформации штаммов XL1-Blue. Эффективность трансформации–более 106 колонеобразующих единиц (КОЕ) на 1 мкг ДНК. Эффективность клонирования контрольного продукта ПЦР превышает 2х104 КОЕ на 1 мкг ДНК. Более 90% рекомбинантных плазмид содержат целевую вставку._x000D_ _x000D_ _x000D_ Условия хранения: -20 °C.