Общая информация:
Антитела к фрагменту F (ab ') 2 генерируются путем переваривания пепсином целых антител IgG для удаления большей части области Fc, оставляя часть шарнирной области. Фрагменты F (ab ') 2 имеют две антигенсвязывающие Fab-части, связанные вместе дисульфидными связями, и поэтому они двухвалентны. Средняя молекулярная масса составляет около 110 кДа. Они используются для конкретных целей, например, чтобы избежать связывания вторичных антител с живыми клетками с рецепторами Fc или с белком A или G.
На основании иммуноэлектрофореза и / или ELISA антитело реагирует с цельномолекулярным мышиным IgG. Он также реагирует с легкими цепями других иммуноглобулинов мыши. Антитело против белков сыворотки, не являющихся иммуноглобулином, обнаружено не было. Антитело было протестировано с помощью ELISA и / или адсорбировано на твердой фазе, чтобы гарантировать минимальную перекрестную реакцию с белками сыворотки крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, сирийского хомяка, лошади, человека, кролика, крысы и овцы, но оно может перекрестно: реагируют с иммуноглобулинами других видов.
Применение:
- Физическое состояние: лиофилизированный твердый продукт;
- Хранение и регидратация: хранить лиофилизированные твердые вещества при 2-8 ° C. Повторно гидратируйте с указанным объемом dH2O и центрифугируйте, если не ясно. Приготовьте рабочий раствор в день использования. Продукт стабилен около 6 недель при 2-8 ° C в виде неразбавленной жидкости;
- Длительное хранение после регидратации: аликвоты и замораживание при -70 ° C или ниже. Избегайте повторного замораживания и оттаивания. В качестве альтернативы добавьте равный объем глицерина (марки ACS или выше) до конечной концентрации 50% и храните при -20 ° C в виде жидкости;
- Срок годности: один год с даты регидратации. Срок годности может быть продлен, если результаты испытаний приемлемы для предполагаемого использования;
- Чистота: антитело очищали от антисыворотки с помощью комбинации расщепления пепсином и иммуноаффинной хроматографии с использованием антигенов, связанных с гранулами агарозы. Фрагменты Fc и целые молекулы IgG были удалены;
- Буфер: 0,01 М фосфат натрия, 0,25 М NaCl, pH 7,6;
- Стабилизатор: 15 мг / мл бычий сывороточный альбумин (без IgG, без протеазы);
- Консервант: 0,05% азид натрия;
- Рекомендуемая рабочая концентрация или диапазон разбавления: 1: 100 - 1: 800 для большинства приложений.
Коэффициенты разведения представлены в виде диапазона, поскольку оптимальное разведение зависит от многих факторов, таких как плотность антигена, проницаемость и т. Д. Фактическое используемое разведение необходимо определять эмпирически.
Конъюгация:
Alexa Fluor® 647
Amax: 651 Emax: 667 нм
Антитела, конъюгированные с Alexa Fluor® 647, поглощают свет максимум около 651 нм и флуоресцируют максимум около 667 нм. Они ярче, чем Cy5 и DyLight 650 в водной среде. Вторичные антитела, конъюгированные с Alexa Fluor® 647 и APC, являются лучшим выбором для проточной цитометрии, когда желательны вторичные антитела, флуоресцирующие на этих длинах волн. Конъюгаты Alexa Fluor® 647 - лучший выбор красителей, излучающих далеко в красный цвет, для обнаружения множественных меток с помощью конфокального микроскопа.
Существенным преимуществом использования Alexa Fluor® 647 перед красителями с меньшей длиной волны является низкая автофлуоресценция биологических образцов в этой области спектра. Однако из-за пика излучения на длине волны 667 нм Alexa Fluor® 647 не может быть хорошо виден глазом, и его нельзя оптимально возбудить ртутной лампой. Поэтому Alexa Fluor® 647 не рекомендуется для использования с обычными эпифлуоресцентными микроскопами. Чаще всего его визуализируют с помощью конфокального микроскопа, оснащенного подходящим лазером для возбуждения и дальним красным детектором. Конъюгаты Alexa Fluor® 647 - менее дорогие альтернативы конъюгатам аллофикоцианина для проточной цитометрии.