Набор для обогащения Thermo Scientific EpiJET 5-hmC позволяет обогащать 5-hmC-содержащей ДНК по немодифицированной ДНК и 5-мC ДНК. В наборе используется модифицирующий фермент 5 hmC, который составлен для высокоспецифичной и эффективной модификации 5-hmC, присутствующей в CpG-динуклеотидах ДНК, и является недостаточным для любой активности по немодифицированным или метилированным цитозинам. Фермент добавляет короткую линкерную молекулу к 5-hmC, к которой биотин конъюгирован на следующей стадии химической модификации. Полученную модифицированную ДНК отделяют от немодифицированной ДНК с использованием магнитных гранул, покрытых стрептавидином._x000D_ _x000D_ Могут быть достигнуты более чем 50-кратное обогащение модифицированной ДНК с 5-hmC по немодифицированной и 5-мC-содержащей ДНК и по меньшей мере 20% извлечению входной ДНК 5-hmC. Для оценки производительности набора включены конкретные контрольные образцы ДНК (немодифицированная и 5-hmC ДНК).

Наборы TOPO® TA Cloning® для секвенирования обеспечивают высокоэффективную 5-минутную стратегию клонирования с одним шагом («клонирование TOPO®») для прямой инсерции ПЦР-продуктов с амплифицированной Taq полимеразой в плазмидный вектор для секвенирования. Каждый комплект использует вектор pCR ™ 4-TOPO® TA со специально разработанными сайтами для секвенирования, которые возвращают больше последовательности вставки и меньше векторной последовательности из каждой реакции и доступны с различными компетентными клетками или без компетентных ячеек в зависимости от ваших потребностей и бюджет. Эти наборы включают все необходимое для клонирования и выбора рекомбинантных векторов, содержащих выбранный вами фрагмент ПЦР.

С5-цитозиновая ДНК-метилтрансфераза SssI Thermo Scientific M.SssI метилирует положение C5 на основной части всех цитозиновых нуклеотидов, содержащихся в неметилированной или гемиметилированной двухцепочечной ДНК в контексте 5'-CpG-3 '. _x000D_ Фермент специально разработан для быстрого времени реакции без ущерба для эффективности реакции. Фермент завершает модификацию всех CpG в течение 15 минут при 37 ° C. Кроме того, фермент был специально подтвержден для использования с геномной ДНК - основным субстратом в эпигенетических исследованиях. _x000D_ _x000D_ M.SssI снабжают оптимизированным 10X реакционным буфером и 50X S-аденозилметионином (SAM) в качестве кофактора.

Рибонуклеаза H (РНКаза H) представляет собой эндорибонуклеазу, которая специфически разлагает цепь РНК гибрида РНК-ДНК с образованием 5'-концевых фосфатных олигорибонуклеотидов и одноцепочечной ДНК._x000D_ _x000D_ Применение_x000D_ Удаление мРНК во время синтеза кДНК второй цепи. Удаление поли (А) последовательностей из мРНК в присутствии олиго (дТ). Олигодезоксирибонуклеотид-направленное расщепление РНК._x000D_ _x000D_ Источник_x000D_ очищен от E.coli, экспрессирующей ген РНКазы H E.coli на плазмиде._x000D_ _x000D_ Тестирование производительности и качества_x000D_ Рибонуклеаза, неспецифическая эндодезоксирибонуклеаза, 3´ и 5´ экзодезоксирибонуклеаза._x000D_ _x000D_ Определение единицы _x000D_ Одна единица гидролизует 1 нмоль РНК в 3H-меченный поли (А) поли (dT) превращается в растворимый в кислоте материал через 20 мин при 37 ° С._x000D_ _x000D_ Условия реакции:_x000D_ 20 мМ Трис-HCl (pH 7,5), 0,1 М KCl, 10 мМ MgCl 2 , 0,1 мМ DTT, 5% (вес / объем) сахарозы, 0,5 нмоль 3 H-меченого поли (А) поли (dT), и фермент в 50 мкл в течение 20 мин при 37 ° С.