Набор для клонирования pCR ™ 8 / GW / TOPO® TA обеспечивает простое 5-минутное клонирование и доступ к векторной платформе клонирования Gateway®. Вектор pCR ™ 8 TOPO® TA содержит минимальную MCS, поэтому вы добавляете больше своей вставки и меньше вектора.

С запатентованными att, вектор pCR ™ 8 - это самый простой способ создания Entry Clone, который облегчает доступ через клонирование рекомбинации Gateway® к множеству векторов экспрессии без утомительного суб-клонирования, что экономит ваше драгоценное время исследований.ППР ™ 8 / GW / TOPO® ТА Cloning Kit предлагает: • ATT сайты для быстрой рекомбинации в различные векторы назначения Gateway®

• 3'-T свесами для прямого лигирования Taq-амплифицированных продуктов ПЦР

• Секвенирующие грунтовочные сайты в пределах 55 п.о. места вставки обеспечивают вам последовательность больше вставки, меньше вектора.

• Ген устойчивости к спектиномицину для надежного отбора в E. coli.

• EcoRI-сайты, фланкирующие сайт для вставки продукта PCR для легкого удаления вставок.

Этот комплект включает One Shot® TOP10 Химически компетентная E. coli .

Тип вектора: пПР

Метод клонирования: TOPO® с Gateway®

Линия продуктов: Gateway®, One Shot®, TA Cloning®, TOPO®

Размер товара: 20 реакций

Набор для клонирования pCR ™ 8 / GW / TOPO® TA содержит адаптированные к TOPO® готовые к использованию pCR ™ 8 / GW / TOPO® Vector, dNTP, солевые растворы, стерильные воды, направляющие и обратные последовательности для праймеров, контроль Шаблоны и ПЦР-праймеры, One Shot® TOP10 Химически компетентные E. coli Химически компетентные E. coli, SOC Medium и контрольная плазмида pUC19. Храните One Shot® E. coli при температуре -80 ° C. Храните все остальные компоненты при -20 ° C. Все реагенты гарантируют стабильность в течение 6 месяцев при правильном хранении.

Щелочная фосфатаза термочувствительная, FastAP™ катализирует выделение 5'- и 3'-фосфатных групп из ДНК, РНК и нуклеотидов. Этот фермент также удаляет фосфатные группы из белков. _x000D_ _x000D_ FastAP представляет собой новую щелочную фосфатазу, которая активна во всех буферах рестрикционных ферментов Thermo Scientific, а также в буферах ПЦР. Он дефосфорилирует все типы концов ДНК (тупые, 5'- и 3'-выступы) за 10 минут при 37 ° C. Фермент инактивируется через 5 минут при 75 ° C ( см. Рисунок 1 в вспомогательных данных). Поэтому удаление лигатуры щелочной фосфатазы не требуется. _x000D_ _x000D_ Основные моменты_x000D_ _x000D_ • Рекомбинантный фермент_x000D_ • Быстрое дефосфорилирование -10 минут при 37 ° C _x000D_ •Быстрая и полная инактивация - 5 минут при 75 ° C _x000D_ • Одновременное переваривание и дефосфорилирование векторной ДНК_x000D_ • 100% активность в рестрикционном ферменте и ПЦР-буферах _x000D_ • Очистка ПЦР в сочетании с Exo I_x000D_ • Дефосфорилирование белка _x000D_ _x000D_ Один протокол для всех типов концов ДНК :_x000D_ • 5'-выступы _x000D_ • 3'-выступы _x000D_ • тупые концы _x000D_ • одиночные нуклеотиды _x000D_ _x000D_ Применение_x000D_ _x000D_ • Дефосфорилирование клонирующей векторной ДНК для предотвращения рециркуляции во время лигирования _x000D_ • Одновременное переваривание и дефосфорилирование векторной ДНК _x000D_ • Очистка продукта ПЦР: деградация нуклеотидов до секвенирования продукта ПЦР_x000D_ • Дефосфорилирование нуклеиновой кислоты , 5'-концов до маркировки с Т4 полинуклеотидкиназы_x000D_ • Другие применения , где дефосфорилирование ДНК и РНК субстратов необходимо _x000D_ • Белок дефосфорилировани

Наборы TOPO® TA Cloning® для субклонирования обеспечивают высокоэффективную стратегию клонирования в течение 5 минут («клонирование TOPO®») для непосредственного введения продуктов ПЦР с амплификацией Taq- полимеразы в плазмидный вектор для субклонирования. В каждом наборе используется вектор pCR ™ 2.1-TOPO® TA с удобными сайтами рестрикции для субклонирования. Комплекты клонирования доступны с различными компетентными ячейками или без компетентных ячеек в зависимости от ваших потребностей и бюджета. Особенности наборов TOPO® TA Cloning® для субклонирования: _x000D_ _x000D_ • Быстрое и легкое - от ПЦР до клонов всего за 3 шага и всего за 5 минут практического времени _x000D_ • Эффективное - до 95% клонов с правильной вставкой _x000D_ • доказанный- надежная работа в течение более десяти лет с более чем 4000 цитированием. _x000D_ • Требуются простые- лигаза, процедуры после ПЦР или праймеры ПЦР, содержащие конкретные последовательности.

T4 β-Глюкозилтрансфераза (T4 BGT) переносит глюкозный фрагмент уридиндифосфоглюкозы (UDP-глюкозы) в остатки 5-гидроксиметилцитозина (5-hmC) в двухцепочечной ДНК, продуцирующей β-глюкозил-5-гидроксиметилцитозин. _x000D_ _x000D_ Thermo Scientific T4 BGT специально разработан для быстрого времени реакции без ущерба для эффективности реакции. Фермент завершает 5-hmC-глюкозилирование 1 мкг ДНК при 37 ° C за 15 минут.