Простые в использовании наборы (двухступенчатые) для скрининга ингибиторов/активаторов SIRT5 содержат достаточно активного фермента для всего планшета. Включает оптимальный субстрат, выбранный из панели сукцинилированных участков. 96-луночный планшет прилагается, но может быть адаптирован к более высокому формату. Включены контрольные ингибиторы. Подходит для высокопроизводительного грохочения (Z'-фактор> 0,73). Оптимальный, специфический субстрат SIRT5 означает низкую концентрацию фермента, что упрощает «успешную» валидацию. В то время как субстрат FLUOR DE LYS®-сукцинил (артикул № BML-KI590, в наборе для флуорометрического анализа лекарственных средств FLUOR DE LYS® SIRT5, артикул № BML-AK413) содержит AMC («синий») флуорофор, который обычно используется благодаря использованию длин волн субстрат FLUOR DE LYS®-Succinyl Green имеет более длинные волны возбуждения/излучения, что позволяет избежать интерференции, часто наблюдаемой при использовании скрининговых соединений на более коротких длинах волн. FLUOR DE LYS® Green SIRT5 Fluorometric Drug Discovery Kit представляет собой полную систему анализа, разработанную для измерения активности лизилдесукцинилазы рекомбинантного человеческого SIRT5, включенного в набор. Черный 96-луночный микропланшет поставляется с набором, но следует отметить, что реагенты системы FLUOR DE LYS® также успешно использовались в других форматах, включая кюветы и 384-луночные планшеты. Анализ флуоресцентной активности Green SIRT5 основан на уникальной комбинации FLUOR DE LYS®-Succinyl GreenSubstrate/Developer. Процедура анализа состоит из двух этапов. Субстрат FLUOR DE LYS®-сукцинил-зеленый, который содержит остаток лизина, N-сукцинилированный на его боковых цепях, сначала инкубируют с человеческим рекомбинантным SIRT5 вместе с косубстратом NAD +. Десукцинилирование FLUOR DE LYS®-Succinyl Green делает его сенсибилизированным, так что на втором этапе обработка проявителем FLUOR DE LYS® приводит к образованию флуорофора. Использование сукцинилированного, а не ацетилированного субстрата с SIRT5 приводит к легко наблюдаемой кинетике насыщения и более чем 1000-кратному увеличению чувствительности анализа.